一抗和二抗的结合方式（一抗与二抗结合原理）
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一抗和二抗结合需要摇床嘛
如果一抗孵育一小时效果不佳，可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。 3 回收一抗。
需要。参考二抗的说明书，按照适当比例用封闭液稀释辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗。吸尽洗涤液后，立即加入稀释好的二抗，室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1至2小时。
加入一抗覆盖细胞，锡纸包裹4度避光过夜。次日：取出细胞复温至室温约1h。冰1‰Tween洗两次，每次5分钟，于摇床。冰PBS洗一次，5分钟，于摇床。
一抗二抗去除液的配比方法如下：在膜完成Western化学发光检测后，蒸馏水中漂洗。弃蒸馏水，加入WesternStrippingbuffer，完全覆盖住膜。摇床上漂洗后制成。
为什么一种二抗可以和多种一抗结合?
一抗通常是根据特定的抗原（目标蛋白）来制备的，只能识别这个蛋白。而二抗制备的时候是用抗体作为抗原的，例如利用小鼠IgG作为抗原，这样，只要一抗是小鼠来源的IgG，二抗就可以识别。因此一个二抗可以识别多个一抗。
一抗是针对抗原的抗体，二抗是针对一抗的抗体。即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体。也就是说，抗原进入机体刺激机体免疫系统产生免疫应由B细胞可以产生与相应抗原发生特异性结合的特殊蛋白质。
再经孵育洗涤后加底物显色进行测定。这种方法与双抗体夹心法不同之处是多加了一层抗体。因此，放大的倍数更高，故比双抗体夹心法更加灵敏。同时避免标记特异性抗体，而另一优点是只要标记一种抗抗体，即可达到多种应用。
一抗偶联生物素就不用二抗了?
1、如果一抗为多克隆抗体，由于多克隆抗体主要是IgG类，因此相应的二抗应该选择抗IgG抗体。
2、如果是同公司同货号的抗体，差异就是在生物素上，生物素化的抗体是在一抗上偶联了生物素，这样可以在下游检测时通过亲和素放大一抗的信号强度，而未生物素化的抗体，需要二抗用anti特异种属的来进行信号放大。
3、之所以用二抗，是因为二抗是带有酶标的抗体，它跟一抗结合之后可以曝光显影。如果你的一抗上面直接带有酶标物，那可以不用二抗直接曝光。但是一般你的一抗都是少数应用的，厂家不会大批量生产，就不会费劲给它加酶标。
4、源性一抗如果需要做共定位，那么就需要不同源性的且要能够用于人组织的，可以做组化的，二抗建议选择驴抗，这样用处多；如果说是做组织化学，那么一抗源性就无所谓了只要能用于人的组织，二抗相应配套就行。
5、SP，但其实和ABC基本原理是一样的，生物素化的二抗孵育之后还需要一步是用HRP（或者其他酶类）标记的链霉卵白素复合物孵育使其与生物素结合，然后和DAB反应的是HRP。